Componentes Humorales y Moleculares del Sistema Inmunitario

Sistema Inmunitario Innato

Principales componentes humorales del Sistema Inmunitario Innato (SII):

  1. Sistema del Complemento: Sistema auxiliar de inmunidad (también SIA) formado por enzimas plasmáticas que se activan en cadena sobre la superficie de patógenos y generan componentes activos con distintas funciones. Para el reconocimiento celular en torrente y líquidos tisulares.
    • Funciones: Lisis de bacterias, opsonización (opsoninas rodean al microbio para facilitar la fagocitosis), inflamación y quimiotaxis.
    • Descubrimiento: El suero de animales infectados (previamente expuestos a la bacteria) aglutina y lisa la misma bacteria al juntar suero y bacteria in vitro. Si el suero se calienta a 56°C durante 30 minutos, se inhibe la lisis pero no la aglutinación, ya que se destruye el complemento. La actividad lítica puede restablecerse con suero fresco de un animal no expuesto al microorganismo.
    • Dos agentes antibacterianos en suero:
      • Anticuerpos: Termoestables. Inducibles por microorganismo (específicos). Capaces de aglutinarlo pero no de destruirlo, necesitan del complemento.
      • Complemento: Termolábil. Contribuye a la destrucción del microorganismo por el anticuerpo. Activo directamente (SII).
    • Cascada de más de 40 proteínas séricas:
      • Producción: Hígado y macrófagos (producción local en el foco de inflamación).
      • Proteínas del complemento: La mayor parte son solubles (inactivas), algunas unidas a membranas. Cada molécula activada cataliza la conversión de las moléculas siguientes en la secuencia, generando una Amplificación que genera una respuesta.
    • Activación del complemento: Tres vías o cascadas enzimáticas de activación que convergen en la formación de la C3 convertasa (depósito de C3b) que inicia la vía común o lítica responsable de la actividad biológica.
    • Efectos de la activación: Activación por proteólisis en fragmentos de distintos tamaños. Los fragmentos grandes se unen covalentemente y activan el siguiente complejo. Los fragmentos pequeños tienen función quimiotáctica como mediadores inflamatorios, también crean poros en el patógeno y lo lisan.
  2. 1.1 Vía Clásica:
    • Activación: Interacción antígeno-anticuerpo (Ag-Ac) y formación de un inmunocomplejo a partir del cual se produce un cambio conformacional en el Ac que le permite unirse al complemento C1 (formado por 2C1q, 2C1r y 2C1s). También puede activarse por Ig agregadas o estímulos no inmunes (proteína C reactiva).
    • Proceso:
      1. Cuando el Ac se une a dos o más cabezas de C1q, C1r se hidroliza y activa.
      2. Esto provoca que C1s se desdoble e hidrolice C4 en C4b + C4a.
      3. C4b se estabiliza uniéndose a la membrana y a C2, siendo este el punto de control de la cascada, formando C2a y C2b.
      4. Se combinan C4b y C2b para dar C4b2b o enzima C3-convertasa que hidroliza C3 a C3b que se une a la membrana de las bacterias o a la convertasa (inicio de la vía común).
      5. La unión de C3b a la convertasa C3 forma la enzima de la vía clásica C4b2b3b o convertasa C5 (hidroliza C5, inicio de la vía lítica) que ataca a la membrana.
    • Resultados: Producción de C3b (por la convertasa C3) y unión a superficies bacterianas (inicio de la vía común) y a la convertasa C3 (para formar la convertasa C5 o C4b2b3b) que activa C5 para el ataque a la membrana con C5a y C5b (Inicio de la vía lítica).
  3. 1.2 Vía de las Lectinas: Secundaria a la vía clásica. Interacción directa con patógenos.
    • Componentes: MBP o MBL (Lectina unidora de manosas), serinas proteasas asociadas a MBP (MASP1 y MASP2), C2 y C4.
    • Activación: No requiere estímulo, amplifica la vía clásica.
      1. Unión de la lectina mediante MBP a moléculas víricas con manosa.
      2. La serina esterasa asociada a MBP (MASP) actúa sobre C4 y da lugar a C4b, el resto es como la vía clásica (punto 3).
      3. C4b2b (convertasa C3) forma C4b2b3b (convertasa C5) y C3b.
  4. 1.3 Vía Alternativa: Más antigua. Reacción normalmente lenta, continua, insuficiente para un efecto apreciable.
    • Activación: El aumento en la producción de C3b acelera la vía, el factor P o properdina estabiliza la convertasa 3 aumentando su eficacia.
    • Proceso:
      1. C3b libre se une al factor B formando el complejo C3bB.
      2. Este actúa como sustrato de la enzima factor D que genera C3bBb o convertasa C3 (hidrólisis del factor B) de la vía alterna.
      3. Esta hidroliza C3 que forma C3b que se une a la superficie bacteriana (inicio de la vía común o lítica), también se une C3b a la convertasa C3 formando la enzima vía alterna C3bBb3b o convertasa 5 (hidroliza C5, inicio de la vía lítica) que ataca la membrana.
    • Resultados: Producción de C3b (por la convertasa C3), unión a superficies bacterianas (inicio de la vía común) y a la convertasa C3 (para formar la convertasa C5 o C3bBb3b) que activa C5 para el ataque a la membrana con C5b y C5a (Inicio de la vía lítica).
  5. 1.4 Vía Común: Vía de ataque a la membrana / Lítica. Mediante el complejo de ataque a la membrana (MAC) o molécula asesina.
    • Formación:
      1. La C5 convertasa actúa sobre C5 escindiéndolo en C5a y C5b.
        • C5a: Induce inflamación y atracción leucocitaria.
        • C5b: Inicia la formación del poro en la membrana (lisis). Se estabiliza uniéndose a C6 o se inactiva pasando a C5bi.
      2. El complejo C5b-C6 (muy lipofílico) se une a C7 y a la membrana.
      3. C8 se une a los complejos de membrana e induce la polimerización de C9 completándose la formación del poro.
      4. Muerte por lisis osmótica.
    • Estructura: Comprende 5 componentes añadidos en serie (C5, C6, C7, C8, C9).
    • Iniciado por la hidrólisis del componente C5 por las convertasas C5 producidas en las vías clásica y de las lectinas (C4b2b3b) y la vía alternativa (C3bBb3b).

Mecanismos de control del complemento

Si no funcionan bien, se presentan patologías.

  1. A. Mecanismos de control inherentes: Degradación de moléculas activas. Dilución en fluidos biológicos (las solubles se encuentran inactivas).
  2. B. Mecanismos de control específicos:
    • B1. Proteínas circulantes:
      • Inhibidor C1/ esterasa C1: Control inicial de la vía clásica, bloquea la acción enzimática de C1 formando un complejo.
      • Factor I: Enzima que degrada C3b, impidiendo la formación de complejos en las vías clásica y alternativa.
      • Factor H: Se une al C3b y acelera la acción destructiva del Factor I. También destruye C4 limitando la vía clásica.
      • S y SP-40,40: Impiden la formación del MAC en la fase lítica.
      • Carboxipeptidasa N: Enzima que hidroliza la arginina de C3a, C4a y C5a inactivándolas.
    • B2. Proteínas unidas a membrana:
      • CD59 / Protectina: Factor inhibidor del MAC (fase lítica vía común), evita la lisis.
      • Factor acelerador del deterioro: Glucoproteína que compite por el C4b inhibiendo la formación de la convertasa C3 vía clásica.

Receptores del complemento

Distintas funciones. Se unen a productos hidrolizados de C3, se encuentran en células del SI.

  • Dos grupos:
    • CR1-CR4: Eliminan inmunocomplejos, aumentan la fagocitosis, activan linfocitos B, facilitan la adhesión celular.
    • Receptores C4a, C3a y C5a: Desgranulación, quimiotaxis, activación de leucocitos y aumento de la permeabilidad vascular.

Funciones y efectos biológicos del Complemento

  1. Opsonización: Opsoninas recubren bacterias, principalmente el complemento C3b, también C4b. Los receptores CR1, 3 y 4 con coestimulador C5a y Fc (fagocitos) permiten reconocer las opsoninas y facilitar la fagocitosis.
  2. Reclutamiento y activación celular: Mediante anafilatoxinas C3a, 5a y 4a (anafilaxia, activan mastocitos y basófilos directamente) y factores quimiotácticos C5a y C3a (atracción de neutrófilos).
  3. Lisis celular: La activación completa por cualquier vía induce la lisis.
  4. Eliminación de inmunocomplejos: El complemento mantiene los complejos solubles (evitando daños) y los elimina de la circulación.
  1. Pentraxinas: Proteínas plasmáticas.
    • Son:
      • Proteína C reactiva (CRP): Aumenta su concentración en infecciones o inflamaciones. Actúa como opsonina y contribuye a la activación del complemento vía clásica.
      • Amiloide sérico P (SAP) y Pentraxina larga (PTX3): Producida por células dendríticas, macrófagos y endoteliales en respuesta a la unión de RTT y a TNF. Se une a células en apoptosis, microorganismos y ligandos como C1q, ofreciendo protección.
  2. Colectinas: Proteínas formadas por una cola similar al colágeno y una cabeza de lectina (Tipo C) dependiente de calcio. Tres son moléculas solubles para el reconocimiento de patrones:
    • Lectina de unión a manosa (MBL): Actúa como opsonina, se fija a receptores de macrófagos y activa el complemento.
    • Surfactante pulmonar SP-A y SP-D: Son colectinas con propiedades tensoactivas lipofílicas, presentes en los alvéolos y modulan la respuesta inmune. Actúan como opsoninas para facilitar la ingestión de patógenos en macrófagos alveolares.
  3. Ficolinas: Opsonizan bacterias y activan el complemento. Se unen a N-acetilglucosamil y ácido lipoteicoico.

Sistema Inmunitario Adaptativo

Moléculas del Sistema Inmunitario Adaptativo:

  1. Generalidades: Gran variedad de moléculas:
    • Comunes con el SII: Complemento.
    • Exclusivas del SIA: BCR, TCR.
    • Linfocitos B: Sintetizan Ig (papel principal) en el citoplasma y en la superficie de la membrana (Receptor BCR). Cada linfocito sintetiza una Ig específica (un único epítopo). Los linfocitos B activados se diferencian en células plasmáticas, que secretan Ig iguales a las reconocidas por el receptor BCR.
    • Linfocitos T: Expresan una gran variedad de TCR asociados a la membrana, son específicos y solo reconocen antígenos (epítopos) unidos a moléculas de MHC.
    • Ocupación de BCR / TCR con un epítopo provoca la activación de vías de transducción de señales y la expresión de moléculas:
      • Solubles: Citocinas y quimiocinas.
      • Unidas a membrana: Receptores y moléculas de adhesión.
  2. Inmunoglobulinas: Son moléculas específicas para antígenos (anticuerpos) propias de células B.
    • Tipos: Las Ig pueden estar en la membrana formando el BCR o secretadas como anticuerpos solubles (formando inmunocomplejos).
    • Anticuerpo: Inmunoglobulina con especificidad por un epítopo concreto entre las moléculas del antígeno. Suelen estar en forma soluble y forman inmunocomplejos por unión no covalente.
  3. 2.1 Estructura básica: Glucoproteínas formadas por cuatro polipéptidos (4 cadenas polipeptídicas iguales dos a dos): 2 pesadas (H=heavy) iguales entre sí (largas, azules) y 2 ligeras (L=light).
    • Las cadenas se estabilizan con puentes disulfuro: Entre dos cadenas pesadas, entre una pesada y una ligera, nunca entre cadenas ligeras.
    • Unidad estructural básica se llama dominio inmunoglobulina: Formado por dos láminas beta, cada una con 3-4 hélices antiparalelas, estabilizadas con puentes disulfuro e interacciones hidrofóbicas.
    • La región o dominio variable aminoterminal (N-terminal) de la cadena ligera y otra pesada forman la región de unión al epítopo.

Cadenas ligeras

Kappa (cromosoma 2) y Lambda (cromosoma 22). Sin diferencias funcionales. Una Ig tiene 2 cadenas ligeras iguales, nunca una de cada. Contienen un dominio variable aminoterminal (VL) y otro constante carboxiterminal (CL). Dentro de las secciones variables hay 3 segmentos hipervariables o CDRs. Regiones armazón: aminoácidos altamente conservados. Los dominios constantes son idénticos en las moléculas de cada tipo y similares entre los dos tipos de cadena.

Cadenas pesadas

5 tipos codificados en el cromosoma 14. Un dominio variable (VH) muy diverso y 3 constantes muy conservados para un mismo isotipo.

Sitios de unión al antígeno (epítopo)

En los dominios variables amino terminal de ambas cadenas (parátopos). En la Ig habrá dos sitios de unión iguales. Ig + proteasas vegetales (pepsina y papaína): Genera fragmentos proteicos que permiten analizar la estructura de la Ig.

  • Papaína: Corte por encima de la zona bisagra genera 3 fragmentos (los brazos):
    1. 2-3 dominios constantes de las cadenas pesadas = Fc (CH2 y CH3).
    2. 2 fragmentos que incluyen los dominios variables.
  • Pepsina: Distintos puntos de corte en las cadenas pesadas (no separa la unión al antígeno). Corta por debajo de los puentes disulfuro de la región bisagra.
    1. 1 gran fragmento con los dos sitios de unión al antígeno, F'(ab)2 (VH y CH1).
    2. Fragmentos de la porción constante de las cadenas pesadas denominados.
  1. 2.2 Isotipos: No tiene que ver con la especificidad del Ag. Pequeñas variaciones genéticas en la secuencia de aminoácidos de las regiones constantes de las cadenas ligeras y pesadas (afectan el tamaño, la carga y la solubilidad de la proteína). Clase/subclase: determinada por el isotipo de la cadena pesada. 5 isotipos de la cadena pesada y 2 isotipos de cadenas ligeras. Los linfocitos B solo producen y exponen un isotipo. Excepción: los linfocitos B no estimulados producen y exponen IgM e IgD. Pequeñas variaciones en las moléculas de los isotipos IgG e IgA permiten diferenciar: Cuatro subclases de IgG y dos subclases de IgA.
    • IgM: 2 formas: Monómero unido a la superficie celular (BCR) y pentámero secretado (anticuerpo soluble). Primera Ig que se forma tras la estimulación antigénica. Función: Inmoviliza el Ag por aglutinación y activa la vía clásica del complemento.
    • IgD: Estructura monomérica, casi exclusivamente en la superficie de los linfocitos B. Función: procesos de reconocimiento.
    • IgA (Más abundante). Forma monomérica (en suero) y dimérica (Ig secretada en fluidos). Predomina en el tracto digestivo (resistente a la degradación por enzimas), también en moco, lágrimas, leche materna. Dos isoformas: IgA α1 (suero y diafragma) e IgA α2 (tubo digestivo).
    • IgE: En suero en concentraciones bajas, salvo en patologías. La mayor parte está unida a receptores en la superficie de mastocitos, basófilos y eosinófilos. Función: señal para la liberación de histamina en mastocitos, hipersensibilidad inmediata.
    • IgG: Abundantes en suero. Forma monomérica en la superficie celular y en moléculas secretadas. Función: Activan el complemento, opsonizan y neutralizan patógenos e inician la citotoxicidad celular dependiente de anticuerpos. Hipersensibilidad.

Variabilidad de las Inmunoglobulinas

Hay variabilidad de cadenas pesadas y ligeras, en el extremo donde se une el Ag hay una región variable (e hipervariable) que diferencia unas Ig de otras, así como el Ag que une. En cada región variable la proteína se pliega: las regiones más variables (CDR o hipervariables, hay tres) determinan la complementariedad del antígeno. Esto proporciona una gran diversidad en el reconocimiento antigénico. Regiones flanqueantes (FR): Regiones, menos variables, que flanquean a las CDR (hipervariables). Parátopo: Zona de contacto íntimo entre el antígeno (epítopo) y la Ig.

Organización genética

: Cada cadena (pesada o ligera) codificada por conjunto genes. Dominio variable: codificado por diferentes genes para cada dominio. Dominios constantes: codificados por un único gen para cada isotipo.

2.3 Características fundamentales anticuerpo: 1. Especificidad: para antígeno determinado, depende secuencia aminoácidos dominios variables.2. Afinidad: Grado de atraccion. Rapidez con la que Ac se une al Ag, depende de fuerza union enlaces (tipo y num). 3. Avidez: Depende del número de sitios de unión. Capacidad Ac de unirse al Ag. La especifidad, la avidez y la afinidad vienen determinadas por: La región Fab del anticuerpo (por encima zona bisagra), La función es determinada por: El fragmento Fc (region por debajo de la zona bisagra).

2.4 Funciones de los anticuerpos: Función básica unirse al antígeno. 1. Aglutinación-Neutralización antígeno: Al ser bi-valentes (2 lugares reconocimiento de antígeno) pueden producir aglutinación para mejor eliminación. 2. Opsonización – Fagocitosis: Los macrófagos con receptores para porción (Fc) pueden engullir patógenos opsonizados. 3. Inmovilización del patógeno: Si el anticuerpo se une a la parte móvil del patógeno (cilios, flagelos) reduce patogenicidad. 4. Activación complemento: Al unirse Ac a Ag se produce cambio conformacional región Fc anticuerpo que induce la activación sistema del complemento. 5. Expulsión: Cuando los antígenos son parásitos intestinales y se unen a anticuerpos tipo IgE (inmunocomplejo) se produce liberacion aminas vasoactivas que relajan musculatura lisa tracto GI (diarrea). 6. Citólisis mediada por anticuerpos (ADDC): Las células efectoras (mayoritariamente linfocitos NK y eosinofilos) al reconocer anticuerpo (region Fc) unido al patogeno, liberan sustancias citotóxicas que atacan antígeno. 7. Inmunidad feto y neonato: En la placenta las Igs maternas son el único mecanismo de defensa específica que tiene el recién nacido, luego calostro y leche materna.

2.5 Determinantes antigénicos en inmunoglobulinas: Corresponden a tres categorías: 1. Isotipo: Determinantes de región constante. En conjunto definen cada clase y subclase de cadena pesada y cada tipo y subtipo de cadena ligera dentro de una especie. Cada isotipo está codificado en un gen de la región constante. Todos los miembros de una especie llevan los mismos genes de región constante (pero diferentes alelos posibles). Especie humana 5. En una especie cada indiv expresa todos los isotipos en sangre. 2. Alotipo: Pequeñas diferencias secuencia aminoácidos región constante cadenas ligeras y pesadas de los anticuerpos de distintos individuos de una especie. Los indiv de una especie heredan mismos genes, pero expresan diferentes alelos (formas de expresion mismo gen), la suma de los determinantes alitipicos en un indiv es su Alotipo. En sp humana alotipos para 4 subclases de IgG, una subclase de IgA y cadena K. 3. Idiotipo: Conjunto de variantes antigénicas (determinantes caracteristicos) de cada anticuerpo de un mismo individuo, debidas a las secuencias aminoácidos porciones variables (VH y VL). El idiotopo puede coincidir o no con un paratopo (sitio unión a epitopo). Los Ac de mismo grupo linfocitos B (y cel plasm) mismo idiotipo (misma region variable), distintos grupos no (idiotipo cruzado).

3. Moleculas del complejo principal de histocompatibilidad (MHC): MHC oComplejo antígenos leucocitarios humanos (HLA). Segmento cromosoma 6 que contiene genes fundamentales para función immunitaria. Algunos codifican enzimas y moléculas necesarias para activación y función de los linfocitos T y B. MHC I: En superficie todas células nucleadas en asociación con la α2-microglobulina (idéntica en todos los individuos de una sp). Tres loci genéticos: HLA – A, HLA – B y HLA – C. Muy polimórficos con más de 100 alelos en cada locus. Cada célula puede presentar en su superficie hasta 6 moléculas MHC I diferentes (heterocigosidad en los tres locus), se pliegan de forma no covalente (hot dog model). MHC II: En la superficie de: Células dendríticas, Linfocitos B, Macrófagos, Algunos Linfocitos T activados, Células epiteliales timo e intestino. Se expresan en codominancia como heterodímeros unidos de forma no covalente. Complementation Cis-Trans: Permite que individuos heterocigóticos para uno o más locus de clase II puedan producir mayor variedad de dímeros que si fueran homocigóticos. Entre las moléculas de MHC III se encuentran los componentes del complemento: C4, Bf, C2. Otras moléculas de histocompatibilidad: HLA-G, HLA-E y HLA-F: homología con moléculas clásicas MHC I. HLA-E: sitios de unión para b-2-microglobulina y CD8, inhibe actividad citotóxica NK y linfocitos T. HLA- F: Amígdalas, bazo y timo. Se une a receptores inhibidores leucocitos. HLA-G: Feto y timo.

4. Receptores de los linfocitos T: Cada linfocito expresa un unico TCR.TCR = heterodímero formado por par polipeptidos con dominos variables y constantes; No pueden reconocer epitopos o peptidos solubles, los AC si. Sólo se unen a fragmentos moléculas que se acoplan a moléculas MHC I y II (Complejos peptido-mhc (pMHC)). Son genes y moléculas diferentes a los de los MHC. El heterodimero se expresa al comienzo del desarrollo del linfocito T. Estructura básica: El TCR está unido a la membrana linfocito T. Contiene colas citoplasmaticas sin motivos de activacion basado en tirosina (ITAM), junto complejo CD3 que proporciona señal activacion. Regiones variables y constantes: Cada cadena polipeptídica del TCR contiene: Una región variable y una constante. Las regiones variables forman regiones hipervariables o regiones determinantes de complementariedad que interactúan con el pMHC.

5. Moléculas de interacción celular: Muchas respuestas inmunitarias requieren interacción entre leucocitos, por contacto directo o por moleculas solubles. Los leucocitos responden a estas señales mediante: 1. La regulación por aumento o disminución funciones. 2. Migración a sitios específicos. (Diapédesis) 3. Decidiendo destino celula (supervivencia / destrucción).

Moléculas: 1. Citocinas: Mensajeros proteicos solubles de bajo peso molecular. Implicadas en todos aspectos de la RI Innata y Adaptativa: Proliferación, diferenciación, inflamación y reparación. Producidas por leucocitos y células no leucocíticas. Muchas son fundamentales para regulación desarrollo linfocitos y determinar tipos R inmune.

2. Quimiocinas: Citocinas de bajo peso molecular. Estimulan atraccion leucocitaria por gradientes (direccionamiento) de concentración hacia foco infección o inflamación.

3. Moléculas de adhesión celular: Proporcionan contacto estable entre células: Respuesta innata, Respuesta adaptativa y Actividades Intercelulares. Tipos: Integrinas: En superficie muchos tipos leucocitos. Aumenta fuerza y tiempo contacto entre leucocitos y otras celulas. Son heterodímeros, combinaciones de cadenas β y α. Interaccionan con otras moléculas y con la matriz extracelular. Selectinas Y Adresinas: Distribución tisular limitada. Diseñadas para identificación tejidos concretos y facilitar interacción celulas.

4. Moléculas grupo de diferenciación: Cluster of differentation (CD): Localizadas en superficie muchos tipos celulares. Indicadores capacidades funcionales leucocitos y células. Tipos: Complejo CD3: Contiene moléculas asociadas al TCR, ayudan a transducir señal transmembrana cuando se activa. CD4: Expresado en superficie 2/3 linfocitos T maduros. Reconoce región moléculas MHC II que no se une al péptido. Los linfocitos TCD4+ (T helper) están limitados al reconocimiento de complejos p-MHC II. CD8: Superficie. Lo expresan 1/3 de los linfocitos T maduros. Reconocen una región de las moléculas MHC I que no se une al péptido. Linfocitos TCD8+ limitados al reconocimiento de complejos p-MHC I = T citotóxicos (Tc) y T supresores (Ts).

5. Moléculas de transdución de señales: Los leucocitos usan sus receptores para controlar entorno, la unión de ligandos provoca cambio conformacional en receptor o en sus moléculas accesorias que desencadenan cascada transduccion de señales que regulan transcripcion genes nucleo. Cascadas típicas de tirosina cinasas: VÍA JAK-STAT: JAK (Cinasa Janus). STAT (transductores señales y activadores transcripción). Proceso: 1. Unión ligandos (citocinas, factores de crecimiento..) induce dimerización receptor y unión a la JAK citosólica. 2. JAK activada provoca que tirosina cinasa fosforila residuos tirosina porción intracelular receptor. 3. Residuos tirosina fosorilados sirven como anclaje para moléculas STAT inactivas al receptor. 4. JAK + receptor fosforilan  STAT unidas al receptor. 5. Disociación y dimerización de STAT que viaja al nucelo para regular transcripcion.VÍA RAS-MAP Cinasa: Proceso: 1. Union ligando induce dimerización receptor. 1.1 Promueve fosforilación tirosina cinasa en receptor catalítico. 1.2 Permite activación tirosina cinasas asociadas al receptor como JAK. 2. La fosfotirosina da anclaje a proteínas con dominios SH2. 3. Tras el anclaje, SHC activa dominio SH3 y se une a la proteína SOS (factor intercambio nucleótidos guanina (GEF) para RAS). 4. El complejo SHC-SOS-RAS intercambia GTP por GDP en RAS. 5. RAS-GTP estimula unión serina cinasa Raf. 6. Raf inicia cascada fosforilación junto MAPKK. 7. Finaliza con factor transcripcion en el nucleo.