Técnicas de Biología Molecular
Secuenciación de ARN
Métodos Indirectos
1. ¿Qué métodos de secuenciación de ARN se basan en la obtención previa de un ADNc mediante transcripción inversa?
Los métodos indirectos de secuenciación de ARN.
Clonación Molecular
Células Hospederas
2. ¿Cuáles son las células más ampliamente utilizadas como hospedadoras para clonar plásmidos, fagos y cósmidos?
Células hospedadoras bacterianas.
Polimorfismos de Longitud de Fragmentos de Restricción (RFLP)
3. Los polimorfismos de longitud de fragmentos de restricción (RFLP) es la metodología para analizar la variabilidad genética a nivel de ADN con fines forenses se basaba en:
El análisis de varios VNTR.
Fases de la Clonación
4. Indica la primera fase del proceso de clonación:
Creación de un vector recombinante.
Transformación
5. ¿Qué nombre recibe la captación e internalización por parte de una bacteria de moléculas de ADN desnudas presentes en el medio externo?
Transformación.
Secuenciación de Maxam y Gilbert
6. ¿En qué se basa el método de secuenciación de Maxam y Gilbert?
En la modificación de las bases nitrogenadas mediante reacciones químicas específicas.
Pirosecuenciación
7. ¿En qué se basa la pirosecuenciación?
En la producción de bioluminiscencia.
Definición de Secuenciación
8. ¿En qué consiste secuenciar una molécula de ácido nucleico?
En determinar el orden de los nucleótidos que la componen.
Clonación Molecular
9. ¿Qué es la clonación molecular?
Un proceso de amplificación IN VIVO de secuencias de ADN genómico o de ADNc basada en la tecnología de ADN recombinante.
Marcadores Genéticos
10. ¿Qué nombre recibe el marcador génico mediante el cual se lleva a cabo la selección e identificación basada en el empleo de vectores con un gen de resistencia y un gen que codifica una proteína fluorescente?
Proteína fluorescente.
Índice de Paternidad
11. ¿Qué parámetro se calcula mediante la expresión matemática IP· 100 / (1 + IP)?
Probabilidad de paternidad.
Vectores Híbridos
12. ¿Qué nombre reciben los vectores híbridos construidos con parte del cromosoma del fago λ y parte de un plásmido bacteriano?
Cósmidos.
Cromosomas Artificiales Bacterianos (BAC)
13. ¿Qué son los BAC?
Cromosomas artificiales bacterianos que pueden transportar insertos de ADN extraño de hasta 300 kb.
Polimorfismos de un Solo Nucleótido (SNP)
14. Respecto al SNP:
Su análisis es muy útil en muestras de ADN muy degradado.
Criterio de Repetitividad
15. ¿Qué permite el criterio de repetitividad respecto de los organismos eucarióticos?
Definir varios tipos de secuencias de ADN.
Limitaciones de la Secuenciación Sanger
16. ¿Qué proceso limita la eficiencia de la secuenciación Sanger en la secuenciación automática de 1ª generación?
Las reacciones de polimerización.
Vectores de Clonación
17. ¿Qué nombre reciben las moléculas de ADN que pueden replicarse autónomamente en una célula hospedadora y que permiten la inserción de ADN extraño?
Vector de clonación.
Secuenciación Masiva (NGS)
18. ¿Qué tipo de secuenciación parte de la necesidad de secuenciar genomas completos individuales en poco tiempo y a bajo coste?
La secuenciación masiva o de 2ª generación o NGS.
ADN Microsatélite
19. ¿Qué tipo de ADN repetido en tándem está formado por secuencias de entre 2 y 6 nucleótidos?
ADN microsatélite.
Polimorfismos
20. ¿Qué nombre reciben las variaciones en la secuencia de un locus específico, con una incidencia en la población superior al 1%?
Polimorfismos.
Análisis del ADN Mitocondrial
21. ¿Qué es el análisis del ADN mitocondrial?
Un recurso en estudios forenses de muestras muy antiguas, muy degradadas o con ausencia de ADN nuclear.
Preparación del Vector de Clonación
22. ¿En qué situación de la preparación del vector de clonación tras el tratamiento enzimático, el vector se transforma en una molécula lineal con extremos cohesivos?
Vector circular con diana de restricción única.
Aplicaciones de la Bioinformática
23. Son aplicaciones imprescindibles de la bioinformática las diseñadas para:
Todas.
Estrategia de Paseo Cromosómico
24. ¿Qué nombre recibe la estrategia de secuenciación a gran escala en la que el genoma que se va a secuenciar se digiere parcialmente con enzimas de restricción?
Paseo cromosómico.
Fases de la Secuenciación Masiva
25. Indica la 1º fase del procedimiento de secuenciación masiva:
Preparación del ADN molde.
Secuencias Alu
26. Las secuencias Alu, que constituyen cerca del 10% de nuestro genoma, son:
(SINE).
Marcadores de Selección
27. ¿Qué característica de los vectores de clonación permite seleccionar las células que portan el vector de aquellas que no lo portan?
Marcador de selección.
Relación de Vectores y Características
a) El vector es un plásmido (Ampicilina y tetraciclina): Resistentes a tetraciclina y sensibles a ampicilina.
b) El vector BAC: Resistentes a cloranfenicol.
c) El vector cósmido: Lactosa + y sensibles a tetraciclinas.
d) El vector plásmido (GFP): Resistentes a ampicilina y no fluorescentes.
Problema
a) Colonias transformadas = b+a // Cantidad de vector plásmido utilizado: C = 25 μl x 0,04 μg/μl= 1μg // Tasa de transformación=(UFC total x VT)/(C x Vs)= células transformadas/μg.
b) (colonias b) =(UFC blancas x VT)/(C x Vs)= células recombinantes/μg.
c) (b/totales a+b)x 100%= % clones recombinantes.
d) (b+a/UFC control)x 100% = % clones recombinantes.
Lectura de Secuencias
Química
Se lee de abajo hacia arriba 5’-3’.
Sanger
Se lee de abajo hacia arriba 5’-3’ y se hace la complementaria empezando por el 3’.
Gráfica
Forward
Izquierda-derecha 5’-3’.
Reverse
Derecha-izquierda 5’-3’ y complementaria.