Reacciones de Precipitación en Fase Fluida

Inmunoturbidimetría e Inmunonefelometría

• Cuantificación de proteínas → se utilizan anticuerpos que reaccionan con proteínas de la muestra.
• Se mide la dispersión de la luz provocada por los complejos Ag-Ac.
La inmunonefelometría es una técnica automatizada para cuantificar proteínas del suero y otros líquidos biológicos con mayor sensibilidad y precisión que las técnicas tradicionales de inmunodifusión radial y turbidimetría.

La turbidimetría mide la disminución de la luz transmitida a través de una suspensión de partículas utilizando para ello un espectrofotómetro.

La nefelometría: mide la luz dispersada en dirección distinta a la luz emitida (generalmente con ángulos entre 15 y 90º). Utiliza como instrumento el nefelómetro. Se suele utilizar para concentraciones más diluidas.

¿Qué son los Inmunoensayos?

• Método analítico basado en la reacción antígeno-anticuerpo (Cualitativos, Semicuantitativos, Cuantitativos).
 Para poder utilizar la reacción Ag-Ac en un inmunoensayo, siempre debe buscarse una forma de hacer evidente esa reacción (revelado).

Marcado: Fluoróforo, látex, hematíes, partículas de colorante, radioisótopos, enzimas, complejos, coloides metálicos.

– Los métodos utilizados para reconocer agentes infecciosos pueden clasificarse en DIRECTOS e INDIRECTOS.
– Gran parte de las técnicas se basan en pruebas serológicas (anticuerpos).
– Es posible detectar la presencia de antígenos antes de la seroconversión.
– Importante para el diagnóstico de laboratorio → toma y procesamiento adecuado de la muestra clínica.
– El diagnóstico clínico orientará hacia la prueba apropiada; información epidemiológica.
– Correcta identificación, edad, fecha de obtención de la muestra.

Recolección y Transporte de Muestras Clínicas

– HISOPADOS CONJUNTIVALES, DE LESIONES Y VESÍCULAS CUTÁNEAS, NASALES, FARÍNGEOS, RECTALES.
– ASPIRADO NASOFARÍNGEO – HECES – ORINA – LÍQUIDO CEFALORRAQUÍDEO (LCR)
– SANGRE CON ANTICOAGULANTE – SUERO

Métodos Directos

– Son aquellos que detectan al agente infeccioso (aislamiento viral, cultivo bacteriano).
– Detectan la presencia de antígenos (Inmunofluorescencia, Enzimoinmunoanálisis, Test de aglutinación).
– Detectan la presencia de ácidos nucleicos virales (PCR).

Métodos Indirectos

– Reconocen la respuesta inmune (humoral o celular) por parte del huésped.
– Primera fase IgM.
– Con el transcurso del tiempo bajan las IgM y aumentan las IgG.
– Las determinaciones serológicas pueden informar sobre el estado inmune del paciente.
– El diagnóstico serológico tiene dificultades en el recién nacido.

Antígenos

 Sustancias que pueden ser reconocidas por reacción con anticuerpos.
 Estructuras químicas muy diferentes: proteínas, lípidos, polisacáridos, ácidos nucleicos.
 Cada antígeno suele presentar varios determinantes antigénicos o epitopos.
 Nativos (proteína purificada a partir de un patógeno).
 Recombinantes.
 Péptidos sintéticos.

Especificidad

 ANTICUERPOS: altamente específicos, siendo capaces de discernir entre pequeñas variaciones del antígeno, tanto a nivel de estructura primaria como de conformación estérica o configuración óptica del mismo.
 INTERACCIÓN ESPECÍFICA: relación entre un antisuero o anticuerpo determinado y el antígeno que ha dado lugar a su producción.
 REACCIÓN CRUZADA: antisuero da reacción positiva con otros antígenos, relacionados o no con el utilizado en la inmunización, o con el que está siendo detectado.

Anticuerpos Policlonales

 Administrando antígeno en animales.
 Vía adecuada.
 Dosis adecuadas.
 Adyuvante adecuado (inmunógeno).
 Producción de anticuerpos con diferentes afinidades y con especificidad por diferentes determinantes antigénicos (anticuerpos policlonales).

Anticuerpos Monoclonales

 Inmortalización de plasmocitos por fusión con células de mieloma de ratón.
 Las células fusionadas (hibridomas) producirán inmunoglobulinas idénticas a las que producía el plasmocito.
 Por dilución límite se puede aislar (clonar) cada hibridoma, mantenerlo y expandirlo en cultivo.

Ventajas con Respecto a los Policlonales:

 Alta especificidad, reconocen un único epitopo (disminuyen reacciones cruzadas).
 Se pueden obtener en cantidades ilimitadas con las mismas características.
 Mayor costo.

Prueba Cruzada

 Se efectúa antes de transfundir la sangre para asegurarse de que los hematíes del donante son compatibles con el receptor.
 Comprenden la determinación del grupo ABO y Rh del receptor así como el estudio de la presencia de anticuerpos irregulares en el suero.
 Si hay anticuerpos positivos es necesario identificarlos.

Exámenes de Evaluación General

Exámenes inmunológicos

  • Exámenes que identifican marcadores: de distintas enfermedades autoinmunes. Son en general autoanticuerpos que se encuentran elevados en estos distintos procesos de enfermedad. Estos anticuerpos tienen distinta sensibilidad y especificidad en las diversas enfermedades.

– FR / Ac antipéptido C citrulinado (ACCP) / Ac antinucleares (ANA) / Ac anti-DNA (a-DNA) / Ac antiantígenos nucleares extractables (a-ENA) / Ac antifosfolípidos: anticardiolipinas (aCL) y anticoagulante lúpico (LAC) / Ac anticitoplasma de neutrófilos (ANCA).

  • Exámenes complementarios al diagnóstico.

– Determinación del complemento C3, C4 y CH50 / Crioglobulinas / Electroforesis de proteínas y cuantificación de inmunoglobulinas.

FR: son autoanticuerpos dirigidos contra el fragmento Fc de una inmunoglobulina G. La técnica de látex detecta fundamentalmente FR de clase IgM, ya que es una inmunoglobulina pentavalente y eficiente como aglutinante. FR se asocia con artritis reumatoide y síndrome de Sjögren.

ACCP: están presentes en artritis erosiva en forma muy precoz.

ANA: corresponde a un polimorfonuclear que ha fagocitado material nuclear de una segunda célula que ha sido reconocida por autoanticuerpos. Se detecta por IFI. Tinción nuclear: homogéneo, granular o moteado, nucleolar, periférico y anticentrómero. El único patrón que es altamente específico es el anticentrómero que es marcador de una esclerosis sistémica progresiva.

Anti-DNA: están dirigidos contra el ADN de una hebra o el de doble hebra (nativo), estos últimos son bastante específicos para LES (95%). Se asocian a compromiso renal lúpico.

Anti-ENA: estos antígenos nucleares son por lo general proteínas no histonas o complejos de ARN-proteínas. Se pueden detectar por inmunoblot, ELISA y difusión en agar.