Métodos de Análisis Bioquímico para Determinar Parámetros Sanguíneos
Colesterol
En los seres humanos, del 60 al 70% del colesterol es transportado por lipoproteínas de baja densidad (LDL), del 20 al 35%, por lipoproteínas de alta densidad (HDL) y del 5 al 12%, por lipoproteínas de muy baja densidad (VLDL)……
MÉTODO DE CARAWAY Y FANGER MODIFICADO
Se basa en la desproteinización en frío y la liberación del colesterol al suero con la mezcla ácido acético – anhídrido acético. Las proteínas se eliminan por centrifugación y al sobrenadante se le mezcla con ácido sulfúrico para efectuar la reacción de Lieberman – Burchard.
150 – 240 mg%
MÉTODO DE LIEBERMAN – BURCHARD
Se emplea una muestra de suero o plasma anticoagulado con EDTA o heparina, pero no con oxalato, citrato o fluoruro. Para la toma de muestra se requiere ayuno mayor o igual a 12 horas
*MÉTODO ENZIMÁTICO
El colesterol es oxidado enzimáticamente por la colesterol oxidasa (CHOD) previa hidrólisis de los ésteres mediante una lipasa de origen fungal. El H2O2 generado en la oxidación produce la copulación oxidativa del fenol con la 4 – aminofenazona mediante una reacción catalizada por la peroxidasa (POD). El producto es una quinonimina roja con absorbancia máxima a 505 nm.
- Hombres: 1,72 – 2,48 g/L.
- Mujeres:1,75 – 2,40 g/L
Glucosa
MÉTODO DE LA ORTO – TOLUIDINA.- El grupo aldehído de la glucosa reacciona con la amina aromática de la orto – toluidina en solución ácida (ác. acético glacial) en presencia de calor para formar una mezcla de glucosilamina y su correspondiente base de Schiff (producto coloreado). 70 – 110 mg% *MÉTODO DE FOLIN – WU.- El sulfato de cobre en solución alcalina forma óxido cuproso tratado con el reactivo fosfomolíbdico de color azul, en una intensidad que depende de la concentración de glucosa presente. 80 – 120 mg% *MÉTODO ENZIMÁTICO.- La glucosa es oxidada enzimáticamente por la glucosa oxidasa (GOD) a ác. glucónico y H2O2; el agua oxigenada en presencia de peroxidasa (POD) produce la unión oxidativa del fenol con la 4–aminofenazona (4 – AF) dando lugar a un cromógeno rojo cereza con absorbancia máxima a 505 nm.
- Suero o plasma :0,70 – 1,10 g/L.
- Sangre total: 0,60 – 1,00 g/L.
- L.C.R.: 0,40 – 0,74 g/L
Urea
*Método enzimático específico (análisis cuantitativo).-La urea se descompone por acción de la ureasa produciendo dióxido de carbono y amoniaco; éste reacciona con fenol e hipoclorito en medio alcalino produciendo azul de indofenol que se determina colorimétricamente. 0,20 – 0,45 g/L. (en individuos de 20 a 45 años
Ácido úrico
-*MÉTODO COLORIMÉTRICO (DETERMINACIÓN CUANTITATIVA).-El ácido úrico de la muestra, previa desproteinización con ácido túngstico preformado, reacciona en medio alcalino de carbonato de sodio con el reactivo fosfo-litio-túngstico produciendo un color azul que es proporcional a la concentración de ácido úrico de la muestra.
- Hombres : 35 – 70 mg/L.
- Mujeres : 25 – 60 mg/L
Creatinina
*MÉTODO COLORIMÉTRICO PARA LA DETERMINACIÓN CUANTITATIVA DE CREATININA.-En un medio alcalino que contiene picrato, la creatinina presente en la muestra reacciona con éste formando un complejo rojizo, cuya mayor absorción se da a 530 nm… 0,6 – 1,4 mg/dL. *MÉTODO DEL PICRATO ALCALINO.-La creatinina en solución alcalina reacciona con el picrato para formar un compuesto rojo anaranjado (Reacción de Jaffé).
Hombres: 0,7 – 1,2 mg/dL. Mujeres: 0,5 – 1,0 mg/dL